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液相色譜儀的發(fā)展并不局限

更新時(shí)間:2015-02-06點(diǎn)擊次數(shù):2344
   液相色譜儀的發(fā)展并不局限
  液相色譜儀檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。 液相色譜儀紫外檢測器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物,大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器,既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源,光強(qiáng)度增加了3~4倍,對(duì)某些藥物的檢測限可達(dá)pg級(jí)。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測,檢測限pg級(jí)。
  液相色譜儀的化學(xué)鍵合固定相是利用化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合到載體表面上,形成均一、牢固的單分子液膜。特點(diǎn)如下:
  1、固定相不易流失,柱的穩(wěn)定性和壽命較高。
  2、能耐受各種溶劑,可用于梯度洗脫。
  3、表面較為均一,沒有液坑,傳質(zhì)快,柱效高。
  4、能鍵合不同基團(tuán)以改變其選擇性。如鍵合氰基和氨基等極性基團(tuán)用于正相色譜,鍵合C2、C4、C6、C8、C18、C22烷基和苯基等非極性基團(tuán)用于反相色譜,鍵合離子交換基團(tuán)用于離子色譜等。
  因此,化學(xué)鍵合固定相是液相色譜儀較為理想的固定相。
  液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
  液相色譜儀流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution),即自洗脫開始到結(jié)束,溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,而整個(gè)液相色譜儀色譜過程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
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