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色譜柱的死體積是什么,怎么計算

更新時間:2021-04-08點擊次數(shù):9782
   色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效。

 


   死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積,即色譜柱內(nèi)流動相的體積。廣義上的死體積是指進樣位置(進樣口)到檢測位置(檢測器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),一旦色譜柱連接,這段體積是不變的(死的)。

   對于HPLC來說,該如何計算死體積呢。 
   死體積(dead volume,V0)——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展,這3部分體積應盡量減小。

   死時間(dead time,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。

   測量系統(tǒng)死體積通常需要通過實驗進行測量,常用方法是通過進一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會有規(guī)定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液,也有直接用100%色譜純甲醇進樣的情形)時,就會得到一個色譜峰,由此峰可以測得死時間(t0),這就是t0的實測結果。

   然后通過計算得到系統(tǒng)死體積:死體積(V0) = 死時間t0×流動相的流速F。

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